多肽合成仪的校准是保障合成产物纯度、产率及实验重复性的核心环节，需针对进液精度、温度控制、压力稳定性、检测系统等关键模块开展系统性校准。以下为符合行业规范的分步校准流程，适用于主流固相多肽合成仪。
一、校准前准备：环境与设备预处理
环境条件确认：将实验室温度稳定在20-25℃(波动≤±1℃)，相对湿度控制在40%-60%，避免气流直吹设备。校准前1小时启动设备预热，确保各模块处于稳定工作状态。
工具与标准物质准备：准备经计量认证的标准设备(如0.01mg级电子天平、标准温度计、精密压力计、100μL标准移液管)，以及无水甲醇(色谱纯)、茚三酮标准溶液(0.1mol/L)等校准用试剂。
设备清洁与检查：拆卸进液管路、反应柱，用无水甲醇冲洗3次后晾干；检查氮气钢瓶压力(≥0.5MPa)，更换老化密封垫，确保管路无泄漏。
二、核心模块校准：精准控制关键参数
(一)进液系统校准：保障试剂计量精度
进液泵流量校准：选取常用进液体积(10μL、50μL、100μL)，设定进液速率10μL/s，将进液管路末端插入预先称重的洁净离心管中，启动进液程序。每个体积梯度重复3次，用电子天平称量收集的无水甲醇质量，根据甲醇密度(20℃时0.7918g/mL)计算实际进液体积，误差需≤±2%，否则调整泵体压力或更换密封圈。
试剂分配精度校准：将不同试剂管路分别连接至标准移液接口，设定单次分配量50μL，重复分配10次至容量瓶中，用容量法验证总体积误差，确保≤±1%；同时检查多管路同步分配时的时间差，需≤0.5秒。
(二)温度与压力系统校准：稳定反应环境
反应温度校准：将标准温度计插入反应柱内部(贴近树脂区域)，分别设定25℃、30℃、40℃三个常用温度点，保温30分钟后读取温度值，每个点重复3次，误差需≤±0.5℃。若超标，通过设备温控模块参数修正或更换加热元件。
氮气压力校准：关闭反应柱出口，将精密压力计接入氮气进气口，设定压力0.1MPa、0.2MPa、0.3MPa，稳定5分钟后读数，误差需≤±0.01MPa。校准后测试氮气吹扫速率，确保树脂翻动均匀且无飞溅。
(三)检测与控制模块校准：保障过程监控准确
茚三酮检测系统校准：配制浓度为0.01mmol/L、0.05mmol/L、0.1mmol/L的茚三酮标准溶液，通过设备自动进样检测，记录吸光度值并绘制标准曲线，相关系数需≥0.995。若线性不佳，清洁检测光路或更换光源。
程序控制校准：编写标准合成程序(含脱保护、洗涤、偶联3个步骤)，记录各步骤实际执行时间与设定时间的偏差，每个步骤重复5次，偏差需≤±1秒。检查步骤切换时的管路切换响应，确保无试剂残留交叉污染。
三、校准后验证与记录：确保校准有效性
空载运行验证：执行校准后的空载合成程序，连续运行3个循环，检查各模块运行状态，确保无漏液、异响、参数漂移等问题。
标准肽合成验证：选择标准五肽(如Leu-Enkephalin)进行合成，通过HPLC检测产物纯度，需≥95%，且与历史校准后数据偏差≤±2%，确认校准效果。
校准记录存档：详细记录校准日期、环境条件、校准人员、标准设备编号、各模块校准数据及偏差值，粘贴校准合格标识，明确下次校准周期(建议每6个月一次，或合成500次后提前校准)。
