一、全自动多肽合成仪设备校准与准备
安装与调试
由专业技术人员进行设备的安装和调试，确保设备能够正确运行。
检查溶剂储液瓶与气体管道是否连接好，仪器各部分是否完好。
打开合成仪电源开关及压缩空气开关，检查压力是否符合范围(如“AIR”表压力大于60psi而小于100psi；“N2”表压力大于5psi而小于10psi)。
校准与测试
根据制造商的说明书进行设备的校准和测试，确保所有系统(如泵、阀、检测器等)都运行正常。
进行温度、条形码、反应器混合搅拌、取液针、氨基酸推瓶的测试；电磁阀测试；化学试剂瓶和氨基酸瓶的流量校准；UV控制校准。
选择合适的反应容器
根据合成规模选择合适的反应容器，并确保容器的材料不会与反应物或溶剂发生反应。
二、试剂与材料准备
试剂准备
准备合成用的氨基酸、活化试剂、溶剂等，确保所有材料都是新鲜且纯净的，以避免杂质的引入。
根据合成方案，按照所需的物质比例进行称量，确保准确性。
将试剂依次装入各贴有相应标签的储液瓶内。
树脂准备
将树脂加入固相合成仪中，用适当的溶剂(如DCM)溶胀树脂，然后抽干。
使用DMF等溶剂洗涤树脂，以去除杂质，洗涤结束后抽干备用。
三、合成操作
设置反应条件
根据所需多肽的序列和长度设定合适的反应条件，包括温度、压力、时间等。
脱保护
去除前一个氨基酸的保护基团，使其能够与下一个氨基酸发生反应。
例如，使用40%三氟乙酸/二氯甲烷溶液脱保护，之后用二氯甲烷、甲醇等洗涤。
偶联
将新的氨基酸与已脱保护的氨基酸结合，形成肽键。
将第一个氨基酸(通常从C端开始)用一定体积的DMF溶解，并加入缩合剂(如DCC、HBTU等)进行活化。
将活化后的氨基酸溶液投入固相合成仪中，补充DMF至适当反应浓度，搅拌进行缩合反应。
洗涤
清洗掉未反应的物质和副产物，确保反应的纯度。
每完成一步合成后，都需要通过洗涤来清除反应产生的副产品和未反应的原料，减少杂质的积累。
重复步骤
重复脱保护和偶联步骤，直到多肽链达到预定长度。
四、产物切割与提纯
树脂裂解
配置裂解液(通常包含TFA等强酸)，并提前置冰柜中冷藏保存。
将肽树脂加入反应釜中，加入预冷的裂解液，搅拌反应以将多肽从树脂上裂解下来。
裂解结束后放出反应液，抽滤除去树脂并以TFA等溶剂洗涤。
多肽纯化
将裂解液转入旋转蒸发仪中室温浓缩至小体积。
使用适当的沉淀剂(如甲基叔丁基醚)使多肽析出，并通过离心、洗涤等步骤得到粗肽。
使用高效液相色谱(HPLC)等方法对粗肽进行纯化，以去除杂质并分离出目标多肽。
浓缩、过滤与冻干
将纯化后的多肽溶液旋蒸除去有机溶剂，得到浓缩的多肽溶液。
对浓缩后的多肽溶液进行无菌过滤。
将过滤后的多肽溶液置于冻干机中，设定适当的升温程序进行冻干处理。
五、质量控制与记录
监控反应进程
使用适当的检测方法(如紫外检测、质谱分析等)监控反应进程，确保每一步的反应都按预期进行。
记录与报告
详细记录每一步的操作参数和结果，包括试剂使用量、反应时间、温度、压力等。
生成实验报告，总结合成过程中的关键数据和产物纯度等信息。
